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產(chǎn)品型號:
所屬分類:BOVOGEN胎牛血清
產(chǎn)品時間:2023-12-21
簡要描述:新西蘭胎牛血清(SFBS),SFBS,Bovogen Biologicals Pty Ltd 由Rick Clements于2001年成立,總部位于澳大利亞墨爾本。貨號:SFBS規(guī)格:500ml千舍生物開工大吉,干細(xì)胞專用,特級胎牛血清*......
新西蘭胎牛血清(SFBS)
產(chǎn)品名稱:新西蘭胎牛血清
貨號:SFBS
規(guī)格:500ml
品牌:BOVOGEN
細(xì)胞培養(yǎng)最基本的是做好污染防控,包括微生物污染的防控和細(xì)胞系間交叉污染的防控。
實驗中需保持良好的操作習(xí)慣,所用材料的位置擺放要順手,污染源和已滅菌物品要分開放置。實驗室也需定期清潔與消毒。
※血清與培養(yǎng)基
通常血清的添加比例為10%,當(dāng)然也可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和生長速率適當(dāng)增加或減少添加比例。在更換血清品牌或者批次時,最好需對血清的品質(zhì)進(jìn)行驗證,防止對實驗造成影響。
對于培養(yǎng)基,目前商品化的比較成熟,穩(wěn)定性也較好。如若需自配培養(yǎng)基時,過濾前攪拌時間不宜過長(培養(yǎng)基中營養(yǎng)豐富,細(xì)菌常溫下20min就可繁殖一代,其代謝產(chǎn)物會對培養(yǎng)基的品質(zhì)產(chǎn)生影響)。培養(yǎng)基過濾除菌后,應(yīng)對培養(yǎng)基進(jìn)行無菌驗證,防止污染。
※細(xì)胞培養(yǎng)瓶
目前商品化的細(xì)胞培養(yǎng)瓶主要為瓶蓋是否帶氣孔兩種。其中不帶透氣孔細(xì)胞培養(yǎng)瓶擰緊后需適當(dāng)回旋瓶蓋,保證CO2能順利進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞培養(yǎng)過程中,對于適應(yīng)能力強的腫瘤細(xì)胞,可在傳代3-4次后更換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶。對于非腫瘤細(xì)胞系如293T,HEK293等細(xì)胞,建議每次傳代更換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶來保證細(xì)胞狀態(tài)。
※細(xì)胞傳代
正常細(xì)胞形態(tài)較好,輪廓清晰,邊緣透亮,細(xì)胞增殖狀況良好。當(dāng)貼壁細(xì)胞長到密度90%時,需進(jìn)行傳代。
傳代時通常使用胰酶消化法。該方法又分為干消化法和濕消化法。
干消化法:胰酶浸潤后棄去胰酶,待細(xì)胞變圓后加入新鮮培養(yǎng)基吹下后再進(jìn)行細(xì)胞傳代。
濕消化法:待細(xì)胞變圓,肉眼觀察下成流沙狀脫落時即可加入新鮮培養(yǎng)基終止消化,1000rpm離心5min,棄去上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸傳代。
吹打細(xì)胞時,手法要輕柔,避免吹打出氣泡,造成細(xì)胞因內(nèi)外壓差破裂,同時需避免刮到瓶壁影響細(xì)胞的貼壁。
不同細(xì)胞的貼壁能力不同,消化時間不同;不同細(xì)胞細(xì)胞間連接強度不一樣,消化時間不同;同一細(xì)胞生長狀狀況不同,消化時間不同。消化時適時觀察細(xì)胞形態(tài),避免因過度消化影響細(xì)胞活性。
傳代間隔時間和傳代比例因細(xì)胞而異。細(xì)胞傳代過程中,當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)狀態(tài)不好或者污染時及時棄去細(xì)胞,重新復(fù)蘇。
※細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
當(dāng)細(xì)胞生長狀況較好或者代數(shù)較早時,需及時大量的凍存。
細(xì)胞凍存液比例為培養(yǎng)基:血清:DMSO=7:2:1,也可血清:DMSO=9:1。細(xì)胞凍存密度通常為1-3×106個/ml。細(xì)胞凍存采用慢凍方式,減少冰晶形成,避免細(xì)胞損傷。通常4℃放置0.5 h,-20℃放置2 h,-80℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。
細(xì)胞復(fù)蘇時升溫要快,防止在解凍過程中水分進(jìn)入細(xì)胞,形成冰晶,影響細(xì)胞存活。38℃水浴不時搖動,在1分鐘內(nèi)使其*融化,1000rpm離心5min,棄去上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸移入培養(yǎng)瓶中。
※用真誠感動細(xì)胞
俗話說,心誠則靈。對待細(xì)胞培養(yǎng)也應(yīng)如此,“自己要用的細(xì)胞自己養(yǎng)",多去觀察細(xì)胞生長狀態(tài)。
所謂“知彼知己,百戰(zhàn)不殆"。培養(yǎng)細(xì)胞需要我們的耐心以及不斷的摸索和積累,了解了每種細(xì)胞各自的習(xí)性后,再“傲嬌"的細(xì)胞也能在我們的“真誠"下認(rèn)真“成長"※※※※
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貼壁細(xì)胞傳代:
1)移棄使用過的細(xì)胞培養(yǎng)液。(不要直接倒掉,避免瓶口殘留導(dǎo)致易污染)
2)使用不含鈣鎂離子的平衡鹽溶液(PBS)沖洗細(xì)胞。從與貼壁細(xì)胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液,以避免攪動細(xì)胞層,前后搖晃容器數(shù)次,最后移棄沖洗液。(洗去殘留的血清,避免影響胰酶的活性。)
3)以 25 cm2的培養(yǎng)瓶為例,向瓶內(nèi)加入1ml胰蛋白酶-EDTA(請根據(jù)各細(xì)胞的指引使用合適的濃度)消化液,輕輕搖動培養(yǎng)瓶,使消化液流遍所有細(xì)胞表面,放到37 ℃ 孵育。通常,幾分鐘內(nèi),會發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大,傾斜培養(yǎng)瓶時細(xì)胞層能自然流下,此時應(yīng)加入2-3ml含血清的*培養(yǎng)液終止消化(細(xì)胞解離所需時間請參考各細(xì)胞的指引,并建議每隔30秒在顯微鏡下觀察細(xì)胞的解離情況)。另外,并不是所有貼壁細(xì)胞都適用采用胰蛋白酶進(jìn)行解離,請根據(jù)各細(xì)胞的指引選擇合適的解離方法。
4)使培養(yǎng)瓶傾斜,吸取培養(yǎng)瓶內(nèi)液體輕輕沖向原細(xì)胞生長表面,重復(fù)該動作2-3次,使所有細(xì)胞沿瓶底流下,再輕柔地把細(xì)胞吹打成單個懸液(吹打過程中應(yīng)避免氣泡的產(chǎn)生)。
PS:對于難消化的細(xì)胞,盡量不要通過用力吹打的方式來處理,以免對細(xì)胞產(chǎn)生物理損傷??梢韵葘⒁呀?jīng)消化的細(xì)胞分出來,及時終止消化。然后再對仍然貼壁的細(xì)胞進(jìn)行再次消化。做到分層消化,避免易消化細(xì)胞長時間在胰酶消化下受損。
5)把所有的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15ml離心管中,800-1000rpm離心3-5分鐘后移棄上清。
6)加入新的含血清*培養(yǎng)液重懸成單細(xì)胞懸液。按各細(xì)胞指引推薦的傳代比例,把細(xì)胞懸液均勻分到各培養(yǎng)器皿中,補足新的含血清*培養(yǎng)液,輕輕搖晃混勻。
7)放到37 ℃ 孵育,第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞的貼壁情況。
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9、如何區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞?
顯微鏡下觀察:活細(xì)胞中間透亮,飽滿,有光澤,死細(xì)胞較暗。也可以通過臺盼藍(lán)染色來計算細(xì)胞活力。
10、如何用臺盼蘭計數(shù)活細(xì)胞?
用無血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200~2000 個/毫升,在0.1 毫升的細(xì)胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻,用血球計數(shù)板計數(shù)細(xì)胞。活細(xì)胞排斥臺盼蘭,因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞,注意計數(shù)需在加入臺盼藍(lán)10min內(nèi)完成。有細(xì)胞計數(shù)儀的,可直接用計數(shù)儀進(jìn)行。
11、二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎?
二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。
12、使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么?
EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前,用EDTA清洗細(xì)胞,以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。
13、可否使用與原先不同的培養(yǎng)基?
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),易造成細(xì)胞狀態(tài)不好,最終造成細(xì)胞無法存活。
14、可否使用與原先不同的血清種類?
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。
15、細(xì)胞為何生長不均勻?
細(xì)胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻,或者放入時搖勻,但在細(xì)胞貼壁前,又移動了培養(yǎng)瓶,頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少,培養(yǎng)箱擱板表面不平整,這些因素會導(dǎo)致細(xì)胞生長不均勻。
16、購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳
研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。運輸過程對細(xì)胞有嚴(yán)重影響。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于–80°C太久。
人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-OV-3+LUC
人肝癌細(xì)胞 smmc-7721
人腦膠質(zhì)瘤 SNB-19
人肝癌細(xì)胞 snu-1
人肝癌細(xì)胞 Snu-182
人膀胱上皮永生化細(xì)胞 sv-huc-1
人滑膜肉瘤細(xì)胞 SW982 [SW-982]
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW1116
人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞 SW-13
人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞 SW1353
人胰腺癌細(xì)胞 SW1990
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW480
人甲狀腺癌細(xì)胞 SW579
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 SW620
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞+GFP SW620+GFP
人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株 SW620/5FU
人膀胱移行細(xì)胞癌 SW780
人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 T24
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 T47D
人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 T98G
人食管癌細(xì)胞 TE-1
人食管癌細(xì)胞 TE-12
人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞 thp-1
人腦膠質(zhì)瘤 TJ905
人乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞株 TPC-1
人甲狀腺癌細(xì)胞 TT
人喉癌細(xì)胞 TU212
人喉癌細(xì)胞 TU-138
人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U118MG(U-118MG)
人成骨肉瘤細(xì)胞 U-2 OS
人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 U251 MG (KO)
人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞 U251 MG/TMZ
人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 U251 MG/TMZ+LUC(3000)
人骨髓瘤細(xì)胞 U266
人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U87MG
人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤+RFP U87MG+RFP
人淋巴瘤細(xì)胞 U-937
人膀胱移行細(xì)胞癌 UM-UC-3
人前列腺癌細(xì)胞 VCAP
人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 WERI-RB-1
人黑素瘤細(xì)胞 WM-115
人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞 WPMY-1
人正常肝細(xì)胞 WRL68
云南宣威人肺腺癌細(xì)胞系+GFP XWLC-05+GFP
人膽囊癌細(xì)胞系 ZJU-0430
人膽囊癌細(xì)胞系熒光素酶標(biāo)記 ZJU-0430+LUC
人乳腺癌細(xì)胞 ZR-75-1
17、細(xì)胞抱團怎么處理?
一些懸浮細(xì)胞抱團生長是正?,F(xiàn)象,大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下,很可能會出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團生長的現(xiàn)象,聚團細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物,殃及周圍的懸浮細(xì)胞,因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團,可以通過細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團,也可以嘗試一下方法:將細(xì)胞懸液收集到15 ml離心管中,靜置20 min左右,小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團)。
18、細(xì)胞內(nèi)有空泡,是否是正?,F(xiàn)象?
部分細(xì)胞本身存在一定的空泡(如HepG2,Ishikawa及一些耐藥株等),這個是正?,F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡,則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳,可以通過調(diào)整血清濃度,控制消化,控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細(xì)胞狀態(tài);如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡,且單個細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多,則可能細(xì)胞代次較高,細(xì)胞老化所致,需更換代次較早的細(xì)胞。
19、細(xì)胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因
很可能是培養(yǎng)體系不適合細(xì)胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度,對細(xì)胞有嚴(yán)重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細(xì)胞,傳代太稀;或者生長較快的細(xì)胞,傳代較密,細(xì)胞嚴(yán)重堆疊生長)。
20、細(xì)胞生長逐漸變慢是什么原因?
細(xì)胞增殖變慢有以下原因:1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細(xì)胞營養(yǎng)不良 4.細(xì)胞頻繁傳代 5.細(xì)胞狀態(tài)不佳或老化 6.細(xì)胞存在污染。
21、培養(yǎng)細(xì)胞時應(yīng)使用5%或10%CO2?
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時,細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10% CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時,則應(yīng)使用5% CO2培養(yǎng)細(xì)胞。
22、CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?
定期(每周一次)更換水盤里面的水,水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子,水盤中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染。
23、細(xì)胞接種密度多少合適?
依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長的一個重要原因。按照我們的經(jīng)驗:一般倍增時間24 h內(nèi)的細(xì)胞,傳代比率1:6-1:12為宜,倍增時間24-48 h的細(xì)胞,傳代比率1:3-1:8為宜,倍增時間超過48h的細(xì)胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。
24、培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點,是污染嗎?
首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁,如果變渾濁,基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁:在顯微鏡下觀察黑點大小和形狀是否規(guī)則,是否運動,是做布朗運動還是呈直線型快速移動。如果黑點大小不規(guī)則,做布朗運動,黑點可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的),也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的,也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點大小一致,快速移動,很可能是細(xì)菌污染。
25、如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中黑點的產(chǎn)生?
掌握細(xì)胞傳代的最佳時機,不要細(xì)胞長老了再傳代;掌握好消化時間,防止消化過度產(chǎn)生細(xì)胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到最佳;嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔。
26、黑點已經(jīng)產(chǎn)生了,如何進(jìn)行處理?
如果判定黑點是污染,請及時將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況,可參照以下進(jìn)行:
如果是懸浮細(xì)胞:收集細(xì)胞上清慢速離心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細(xì)胞:將細(xì)胞用PBS洗2-3遍,洗的時候,輕輕拍打培養(yǎng)瓶,讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落,再棄去PBS,消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右,讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來,去掉低濃度胰酶,然后正常消化細(xì)胞,將收集的細(xì)胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶,并可以嘗試適當(dāng)增加血清濃度進(jìn)行培養(yǎng)。
27、培養(yǎng)用dish,flask是否相同?
不同廠牌的dish或flask,其所coating的polymer不同,制造程序亦不同,雖對大部分細(xì)胞沒有太大之影響,惟少數(shù)細(xì)胞則可能因使用廠牌不同之dish或flask而有顯著之生長差異。
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WINSERA®胎牛血清 | 貨號 | 規(guī)格 | 庫存狀態(tài) |
優(yōu)級 | FBS500-WS-002 | 500ML | 現(xiàn)貨 |
特級 | FBS500-WP-002 | 500ML | 現(xiàn)貨 |
ES級別 | FBS500-WE-002 | 500ML | 現(xiàn)貨 |
無外泌體血清 | FBS050-EXO | 500ML | 現(xiàn)貨 |
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