小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14 ，MC3T3-E1subclone 14  

細(xì)胞名稱：小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14

培養(yǎng)條件：MEMα(添加NaHCO3 1.5g/L+肌醇 43.2mg/L+葉酸 8.82mg/L+β-巰基乙醇 7.8mg/L)+ FBS 10%+P/S 1%     

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-A McCOY'S 5A+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-A McCOY'S 5A+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人子宮膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-B MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人胚腎細(xì)胞 HEK-293（293） MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長(zhǎng)

人胚腎細(xì)胞HEK-293細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株（KCNA5（human NaV1.5-egfp） HEK-293+EGFP MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長(zhǎng)

人胚腎細(xì)胞 HEK-293A DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長(zhǎng)

人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞 HEL 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人子宮頸癌細(xì)胞 HELA MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人宮頸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HELA+LUC   MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人宮頸癌細(xì)胞 chang liver  MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人宮頸癌細(xì)胞 HeLa.S3 F12K+10%FBS+1%P/S   貼壁生長(zhǎng)

人肝癌細(xì)胞 hepg2.2.15 MEM+10%FBS+0.38mg/ml G418+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人肝癌細(xì)胞 Hep3B2.1-7 [Hep3B] MEM+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人肝癌細(xì)胞 HEPG2 MEM+10%FBS+1%P/S   貼壁生長(zhǎng)

人肝癌細(xì)胞+GEP hepG2+GFP MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人肺成纖維細(xì)胞 HFL1 F12k+10%FBS+1%PS 貼壁生長(zhǎng)

人 SV40  轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞 HFOB1.19 DMEM/F12+10%FBS+0.3mg/ml G418+1%P/S 33.5℃ 貼壁生長(zhǎng)

人胃癌細(xì)胞 HGC-27 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞 HK-2 角質(zhì)無(wú)血清培養(yǎng)基（D-KSFM 推薦：iCell-019） 貼壁生長(zhǎng)

人腎上皮細(xì)胞 HKb-20 DMEM+10%FBS+800μg/ml G418+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人早幼粒白血病細(xì)胞 HL 60（hl-60） IMDM+20%FBS+1%P/S   懸浮生長(zhǎng)

人肝細(xì)胞 HL-7702[L-02] 1640+20%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人小膠質(zhì)細(xì)胞 HMC3 MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞 HO-8910PM 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人骨肉瘤細(xì)胞 HOS MEM+10%FBS+1%NEAA+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人胰腺癌細(xì)胞 HPAC D/F12+5%FBS+0.002mg/ml胰島素+0.005mg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白+40ng/ml氫化的松+10ng/ml表皮生長(zhǎng)因子EGF +1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人胎盤(pán)細(xì)胞（有限細(xì)胞系） Hs 815.Pl DMEM+10%FBS+1%P/S   貼壁生長(zhǎng)

人乳腺癌細(xì)胞 HS578T DMEM+0.01mg/ml牛胰島素+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 HS683 DMEM+15%FBS+1%P/S   貼壁生長(zhǎng)

人真皮成纖維細(xì)胞（原代細(xì)胞永生化） HSF(SV40) D/F12+10%FBS+1%p/s+0.005mg/ml胰島素+5ng/mlBfGF+1ug/ml氫化的松+50ug/ml抗壞血酸（維C）+7.5mM L-Gln (推薦：PriMed-iCell-003) 貼壁生長(zhǎng)

人纖維肉瘤細(xì)胞 HT-1080 MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人膀胱癌細(xì)胞 HT-1376 MEM+10%FBS+1%P/S   貼壁生長(zhǎng)

人結(jié)腸癌細(xì)胞 HT-29 (HT29) McCOY's 5A +10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞 HTMC DMEM/F-12+15%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人胰腺導(dǎo)管細(xì)胞 HPNE 75%DMEM(無(wú)糖)+25%Medium M3 +5%FBS+10ng/mlrh EGF+2.5mM D-葡萄糖+750 ng/ml 嘌呤霉素+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞 HUH-6 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS +1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人肝癌細(xì)胞 huh-7 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS +1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人肝癌細(xì)胞 huh-7.5.1 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS +1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 HUT-78 IMDM+20%FBS+1%PS 懸浮生長(zhǎng)

人十二脂腸腺癌 HUTU-80 MEM+10%FBS+1%P/S    貼壁生長(zhǎng)

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（原代細(xì)胞永生化） HUVEC 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002） 貼壁生長(zhǎng)

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 HUV-EC-C 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002） 貼壁生長(zhǎng)

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+RFP HUVEC+RFP 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002） 貼壁生長(zhǎng)

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+GFP HUVEC+GFP 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002） 貼壁生長(zhǎng)

人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 iPS *培養(yǎng)基500ml++細(xì)胞消化液500ml+復(fù)蘇專用因子1mg+matrix基質(zhì)膠5ML 貼壁生長(zhǎng)

人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 Ishikawa MEM+15%FBS+1%NEAA+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人正常卵巢上皮細(xì)胞系 IOSE-80（IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN） 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人胚肺成纖維細(xì)胞 IMR-90 MEM+20%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞 J.gamma1 1640+10%FBS+1%P/S 懸浮生長(zhǎng)

人膀胱移行細(xì)胞癌 J82 MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人胎盤(pán)絨毛癌細(xì)胞 JAR 1640+10%FBS+1%丙酮酸鈉+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人胰腺癌細(xì)胞 JF-305 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人絨毛膜癌細(xì)胞 JEG-3 MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 Jurkat（clone E6-1） 1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S 懸浮生長(zhǎng)

人慢性骨髓性白血病細(xì)胞系 K562 IMDM + 10%FBS+1%P/S 懸浮+貼壁（少量）生長(zhǎng)

人K562耐阿霉素細(xì)胞株 K562/ADR 1640+10%FBS+1%P/S+1ug/mlADR 懸浮+貼壁（少量）生長(zhǎng)

人口腔表皮癌細(xì)胞 KB MEM+10%FBS +1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人急性髓性白血病細(xì)胞 KG-1a IMDM + 10%FBS+1%P/S 懸浮生長(zhǎng)

人卵巢顆粒細(xì)胞瘤細(xì)胞 KGN D/F12+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 KNS-89 DMEM +10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞 KU812 1640+10%FBS+1%P/S   懸浮生長(zhǎng)

人食道癌細(xì)胞 kyse30 48%1640+48%F-12+2%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人肝癌細(xì)胞 Li-7 1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 LN229 DMEM+5%FBS+1%P/S   貼壁生長(zhǎng)

人前列腺癌細(xì)胞 LNCaP clone FGC 1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 lovo F12K+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株 LOVO/5FU F12K+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人結(jié)直腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LOVO+LUC F12K+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 LS174T  MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 LS180 MEM+10%FBS+1%P/S 該細(xì)胞不能使用胰酶消化 貼壁生長(zhǎng)

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 LS513 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人肝星形細(xì)胞 LX-2 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

 

細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

一、污染防控

細(xì)胞培養(yǎng)最基本的是做好污染防控，包括微生物污染的防控和細(xì)胞系間交叉污染的防控。

實(shí)驗(yàn)中需保持良好的操作習(xí)慣，所用材料的位置擺放要順手，污染源和已滅菌物品要分開(kāi)放置。實(shí)驗(yàn)室也需定期清潔與消毒。

二、血清與培養(yǎng)基

 

通常血清的添加比例為10%，當(dāng)然也可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和生長(zhǎng)速率適當(dāng)增加或減少添加比例。在更換血清品牌或者批次時(shí)，最好需對(duì)血清的品質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響。

對(duì)于培養(yǎng)基，目前商品化的比較成熟，穩(wěn)定性也較好。如若需自配培養(yǎng)基時(shí)，過(guò)濾前攪拌時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)（培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)豐富，細(xì)菌常溫下20min就可繁殖一代，其代謝產(chǎn)物會(huì)對(duì)培養(yǎng)基的品質(zhì)產(chǎn)生影響）。培養(yǎng)基過(guò)濾除菌后，應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行無(wú)菌驗(yàn)證，防止污染。

 

三、細(xì)胞培養(yǎng)瓶

目前商品化的細(xì)胞培養(yǎng)瓶主要為瓶蓋是否帶氣孔兩種。其中不帶透氣孔細(xì)胞培養(yǎng)瓶擰緊后需適當(dāng)回旋瓶蓋，保證CO₂能順利進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，對(duì)于適應(yīng)能力強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞，可在傳代3-4次后更換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶。對(duì)于非腫瘤細(xì)胞系如293T，HEK293等細(xì)胞，建議每次傳代更換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶來(lái)保證細(xì)胞狀態(tài)。

四、細(xì)胞傳代

 

正常細(xì)胞形態(tài)較好，輪廓清晰，邊緣透亮，細(xì)胞增殖狀況良好。當(dāng)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)到密度90%時(shí)，需進(jìn)行傳代。

傳代時(shí)通常使用胰酶消化法。該方法又分為干消化法和濕消化法。

干消化法：胰酶浸潤(rùn)后棄去胰酶，待細(xì)胞變圓后加入新鮮培養(yǎng)基吹下后再進(jìn)行細(xì)胞傳代。

濕消化法：待細(xì)胞變圓，肉眼觀察下成流沙狀脫落時(shí)即可加入新鮮培養(yǎng)基終止消化，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸傳代。

吹打細(xì)胞時(shí)，手法要輕柔，避免吹打出氣泡，造成細(xì)胞因內(nèi)外壓差破裂，同時(shí)需避免刮到瓶壁影響細(xì)胞的貼壁。

不同細(xì)胞的貼壁能力不同，消化時(shí)間不同；不同細(xì)胞細(xì)胞間連接強(qiáng)度不一樣，消化時(shí)間不同；同一細(xì)胞生長(zhǎng)狀狀況不同，消化時(shí)間不同。消化時(shí)適時(shí)觀察細(xì)胞形態(tài)，避免因過(guò)度消化影響細(xì)胞活性。

       傳代間隔時(shí)間和傳代比例因細(xì)胞而異。細(xì)胞傳代過(guò)程中，當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)狀態(tài)不好或者污染時(shí)及時(shí)棄去細(xì)胞，重新復(fù)蘇。

 

五、細(xì)胞凍存與復(fù)蘇

 

當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況較好或者代數(shù)較早時(shí)，需及時(shí)大量的凍存。

細(xì)胞凍存液比例為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1，也可血清：DMSO=9:1。細(xì)胞凍存密度通常為1-3×10⁶個(gè)/ml。細(xì)胞凍存采用慢凍方式，減少冰晶形成，避免細(xì)胞損傷。通常4℃放置0.5 h，-20℃放置2 h，-80℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)升溫要快，防止在解凍過(guò)程中水分進(jìn)入細(xì)胞，形成冰晶，影響細(xì)胞存活。38℃水浴不時(shí)搖動(dòng)，在1分鐘內(nèi)使其*融化，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸移入培養(yǎng)瓶中。

 

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