您好，歡迎來到蘇州千舍生物科技有限公司！
15371470969
您好，歡迎來到蘇州千舍生物科技有限公司！
15371470969
貨號(hào)：WS010-100-KIT
品牌：WinSera
規(guī)格：100ml
操作步驟：
1、 原代
(1)取材后的肝癌組織須在 2 - 8℃含有組織保存液E的取樣瓶中，快速轉(zhuǎn)運(yùn)至潔凈實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行組織處理和干細(xì)胞分離，拍照并登記信息。
(2)準(zhǔn)備若干培養(yǎng)皿，加入 4℃預(yù)冷的肝癌類器官培養(yǎng)緩沖液 B備用
(3)取樣瓶消毒，將組織放入培養(yǎng)皿中，利用肝癌類器官培養(yǎng)緩沖液B清洗三次后，利用眼科剪或手術(shù)刀將腫瘤組織剪切成體積約為 1~3 mm3 的組織塊。
(4)組織用肝癌原代組織消化液C消化，37℃震蕩消化10-20 min，（消化過程中隨時(shí)觀察消化情況）。
(5)取少量液體在顯微鏡下觀察，鏡下觀察到較多的單個(gè)細(xì)胞或 70μ m 以下的細(xì)胞簇后，加入三倍體積肝癌類器官培養(yǎng)緩沖液B終止消化。
(6)使用100μm孔徑的篩網(wǎng)進(jìn)行過濾，將濾液收集后，于300g富集離心5min后移去上清，添加肝癌類器官培養(yǎng)緩沖液B重新重懸離心。
(7)基質(zhì)膠計(jì)算：第6步后觀察收集到的組織體積，添加25倍組織體積的基質(zhì)膠重懸鋪板。
(8)24孔細(xì)胞培養(yǎng)板為例，每孔點(diǎn)膠25ul組織基質(zhì)膠混合物進(jìn)行鋪板（4℃下操作）。
(9)將鋪好的培養(yǎng)板放入37℃培養(yǎng)箱中10-15min成膠，添加肝癌類器官培養(yǎng)基A（恢復(fù)室溫）進(jìn)行培養(yǎng)。
2、 類器官傳代培養(yǎng)
(1)移液器吸去培養(yǎng)基，每孔添加1-2ml 4℃類器官緩沖液B放置2min。
(2)移液搶輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15ml離心管中，4℃靜置10min。（每6-8孔為一組）
(3): 3.1類器官數(shù)量不足或體積較小時(shí)： 離心5min棄去上清，添加適量肝癌類器官緩沖液B重懸移入1.5ml離心管，300g離心5min棄去液體進(jìn)行第4步。 3.2類器官數(shù)量較多或體積較大時(shí)：離心5min棄去上清，添加適量類器官傳代消化液D消化2-3min，添加肝癌類器官緩沖液B終止消化，離心5min棄去混合液，添加適量肝癌類器官緩沖液B重懸移入1.5ml離心管，300g離心5min棄去液體進(jìn)行第4步。
(4)類器官收集后，添加基質(zhì)膠重懸，每孔25μl基質(zhì)膠鋪在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，放置培養(yǎng)箱中10-15min添加500μl肝癌類器官培養(yǎng)基A。
3、類器官凍存
(1)移液器吸去培養(yǎng)基，每孔添加1-2ml 4℃類器官緩沖液B放置2min。
(2)移液搶輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15ml離心管中，4℃靜置10min。（每6-8孔為一組）
(3) 離心5min棄去上清，添加適量肝癌類器官緩沖液B再次重懸，300g離心5min棄去液體。
(4)添加適量類器官凍存液 F，輕柔吹打重懸，以24孔細(xì)胞培養(yǎng)板為例：密度為2個(gè)孔凍存1管，每管體積1.4ml。
(5)做好標(biāo)記信息，進(jìn)行程序降溫后，移入液氮長(zhǎng)期保存，
4、 類器官?gòu)?fù)蘇
(1)取10ml肝癌類器官培養(yǎng)緩沖液B于15ml離心管中
(2)從液氮罐中取出凍存的類器官細(xì)胞，快速置于 37℃水浴鍋中融解。
(3)水浴融解過程中，需輕輕搖動(dòng)冷凍管，以確保凍存液在 1-2 分鐘內(nèi)w全融解。
(4)將溶解后的類器官細(xì)胞快速轉(zhuǎn)移至15ml 離心管，使用移液管輕輕吹打6-8次，300g 離心 5分鐘，然后除去上清液并收集類器官細(xì)胞沉淀。添加適量肝癌類器官緩沖液B重懸移入1.5ml離心管300g離心5min。
(5)基質(zhì)膠重懸，每孔25μl基質(zhì)膠鋪在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，放置培養(yǎng)箱中10-15min成膠，添加500μl肝癌類器官培養(yǎng)基A。
運(yùn)用范圍:
FOR LABORATORY RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES
培養(yǎng)圖片展示:
送樣要求及癌種
樣本的質(zhì)量將極大影響類器官培養(yǎng)的成功率和效率，因此建議客戶提供的樣本需符合以下幾項(xiàng)要求：
樣本類型與要求 | 新鮮胸腹液： 50~100 mL，低溫?zé)o菌保存。 手術(shù)樣品： 體積大于黃豆大小、越大越好，非纖維化激化灶（越大越好，于腫瘤邊緣，12點(diǎn)、3點(diǎn)、6點(diǎn)與9點(diǎn)方向，各取一塊)，裝入公司專門取樣保持管，4度保存，標(biāo)明樣本信息，冷藏運(yùn)輸（48小時(shí)內(nèi)） 穿刺樣品：長(zhǎng)于2 cm，裝入樣品瓶，4度保存，標(biāo)明樣本信息，冷藏運(yùn)輸。 |
培養(yǎng)周期 | 3-4周 |
微信公眾號(hào)-關(guān)注我們最新動(dòng)態(tài)
公司：蘇州千舍生物科技有限公司
聯(lián)系人：張昕
聯(lián)系郵箱：31109701304@qq.com
聯(lián)系地址：江蘇省蘇州市綠地大道1355號(hào)
