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盒裝胎牛血清|臨期*

名稱(chēng)：盒裝胎牛血清

貨號(hào)：A3160802

干細(xì)胞是在所有多細(xì)胞生物中發(fā)現(xiàn)的原始細(xì)胞。

它們保留了通過(guò)有絲分裂細(xì)胞分裂來(lái)更新自身的能力，并且可以分化成多種專(zhuān)門(mén)細(xì)胞類(lèi)型。

哺乳動(dòng)物干細(xì)胞的三大類(lèi)是：源自胚泡的胚胎干細(xì)胞，在成人組織中發(fā)現(xiàn)的成年干細(xì)胞和在臍帶中發(fā)現(xiàn)的臍帶血干細(xì)胞。

在發(fā)育中的胚胎中，干細(xì)胞可以分化為所有專(zhuān)門(mén)的胚胎組織。

在成年生物中，干細(xì)胞和祖細(xì)胞可作為人體的修復(fù)系統(tǒng)，補(bǔ)充專(zhuān)門(mén)的細(xì)胞。

由于干細(xì)胞可以通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)而生長(zhǎng)并轉(zhuǎn)化為具有與諸如肌肉或神經(jīng)等各種組織的細(xì)胞一致的特性的特化細(xì)胞，因此提出了將其用于醫(yī)學(xué)治療中。

特別是，胚胎細(xì)胞系，通過(guò)治療性克隆產(chǎn)生的自體胚胎干細(xì)胞以及來(lái)自臍帶血或骨髓的高可塑性成年干細(xì)胞被吹捧為有前途的候選者。

醫(yī)學(xué)研究人員認(rèn)為，干細(xì)胞療法有可能從根本上改變?nèi)祟?lèi)疾病的治療方法。

已經(jīng)存在許多成人干細(xì)胞療法，尤其是用于治療白血病的骨髓移植。

在干細(xì)胞研究中，有時(shí)需要體外培養(yǎng)和分析細(xì)胞。細(xì)胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian品牌特級(jí)進(jìn)口胎牛血清，它的內(nèi)毒素小于3Eu/ml，使細(xì)胞更健康，客戶做實(shí)驗(yàn)更加順利。

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多達(dá) 90 項(xiàng)質(zhì)量測(cè)試，包括 EMA 病毒檢測(cè)；USP/EP 支原體，內(nèi)毒素，性能；生化/激素分析；Oritain 指紋識(shí)別

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12、使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么?

EDTA用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞，以消除來(lái)自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子。

13、可否使用與原先不同的培養(yǎng)基?

不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng)，易造成細(xì)胞狀態(tài)不好，最終造成細(xì)胞無(wú)法存活。

14、可否使用與原先不同的血清種類(lèi)?

不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。

15、細(xì)胞為何生長(zhǎng)不均勻?

細(xì)胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒(méi)有搖勻，或者放入時(shí)搖勻，但在細(xì)胞貼壁前，又移動(dòng)了培養(yǎng)瓶，頻繁開(kāi)關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動(dòng)或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過(guò)少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會(huì)導(dǎo)致16、購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳

研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳，常見(jiàn)原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。運(yùn)輸過(guò)程對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響。解凍過(guò)程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久。

17、細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理?

一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周?chē)膽腋〖?xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過(guò)細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán))。

18、細(xì)胞內(nèi)有空泡，是否是正?，F(xiàn)象?

部分細(xì)胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個(gè)是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳，可以通過(guò)調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時(shí)間等方法來(lái)調(diào)整細(xì)胞狀態(tài);如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡，且單個(gè)細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細(xì)胞代次較高，細(xì)胞老化所致，需更換代次較早的細(xì)胞。

19、細(xì)胞傳兩代后開(kāi)始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細(xì)胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過(guò)度，對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴(lài)性的細(xì)胞，傳代太稀;或者生長(zhǎng)較快的細(xì)胞，傳代較密，細(xì)胞嚴(yán)重堆疊生長(zhǎng))。

20、細(xì)胞生長(zhǎng)逐漸變慢是什么原因?

細(xì)胞增殖變慢有以下原因：1. 消化過(guò)度 2. 傳代過(guò)密 3.細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良 4.細(xì)胞頻繁傳代 5.細(xì)胞狀態(tài)不佳或老化 6.細(xì)胞存在污染。

21、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%或10%CO2?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10% CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時(shí)，則應(yīng)使用5% CO2培養(yǎng)細(xì)胞。

22、CO2培養(yǎng)箱之水盤(pán)如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤(pán)里面的水，水盤(pán)的水必須使用無(wú)菌蒸餾水或無(wú)菌去離子，水盤(pán)中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染。

23、細(xì)胞接種密度多少合適?

依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤(pán)的比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)的一個(gè)重要原因。按照我們的經(jīng)驗(yàn)：一般倍增時(shí)間24 h內(nèi)的細(xì)胞，傳代比率1:6-1:12為宜，倍增時(shí)間24-48 h的細(xì)胞，傳代比率1:3-1:8為宜，倍增時(shí)間超過(guò)48h的細(xì)胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。

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人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型

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人子宮頸鱗癌細(xì)胞 SIHa

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人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞 SK-N-MC

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人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 T98G

人食管癌細(xì)胞 TE-1

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人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞 thp-1

人腦膠質(zhì)瘤 TJ905

人乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞株 TPC-1

24、培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn)，是污染嗎?

首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒(méi)有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則，是否運(yùn)動(dòng)，是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng)。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動(dòng)，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過(guò)度引起的)，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點(diǎn)大小一致，快速移動(dòng)，很可能是細(xì)菌污染。

25、如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)的產(chǎn)生?

掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī)，不要細(xì)胞長(zhǎng)老了再傳代;掌握好消化時(shí)間，防止消化過(guò)度產(chǎn)生細(xì)胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到最佳;嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔。26、黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進(jìn)行處理?

如果判定黑點(diǎn)是污染，請(qǐng)及時(shí)將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進(jìn)行：

如果是懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞上清慢速離心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS洗2-3遍，洗的時(shí)候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時(shí)先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來(lái)，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細(xì)胞，將收集的細(xì)胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶，并可以嘗試適當(dāng)增加血清濃度進(jìn)行培養(yǎng)。

27、培養(yǎng)用dish,flask是否相同？

不同廠牌的dish或flask，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同，雖對(duì)大部分細(xì)胞沒(méi)有太大之影響，惟少數(shù)細(xì)胞則可能因使用廠牌不同之dish或flask而有顯著之生長(zhǎng)差異。