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 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)該注意哪些問(wèn)題？

#1細(xì)胞培養(yǎng)步驟一般包括：解凍、培養(yǎng)、分盤、凍存。基本上都遵循這個(gè)步驟，細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程，我們往往發(fā)生在步驟3，在做細(xì)胞功能性實(shí)驗(yàn)時(shí)，往往在步驟2，解凍和凍存就是細(xì)胞的儲(chǔ)藏和分離的過(guò)程。

#2首先我們要獲得細(xì)胞，一般受大家比較認(rèn)可的細(xì)胞庫(kù)有1962年ATCC建立的CELL LINES、中科院、DSMZ等機(jī)構(gòu)。

#3細(xì)胞解凍要求37度快速解凍，另外就是注意不同細(xì)胞的培養(yǎng)條件。

#4同規(guī)格培養(yǎng)器皿所需要的細(xì)胞生長(zhǎng)密度也不同，如下圖：

#5細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生各種代謝廢物，造成培養(yǎng)液PH變化，所以培養(yǎng)過(guò)程中，遇到細(xì)胞培養(yǎng)液變化較為明顯時(shí)，要及時(shí)更換培養(yǎng)液，保證細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。

#6細(xì)胞離心時(shí)也要注意，強(qiáng)烈的離心力會(huì)使得細(xì)胞大量積聚離心管底部，造成大量細(xì)胞擠壓破碎，一般不要超過(guò)300g，5-10min即可。

#7此外離心機(jī)分為固定轉(zhuǎn)角離心機(jī)和自由轉(zhuǎn)角離心機(jī)，固定轉(zhuǎn)角的離心機(jī)會(huì)使細(xì)胞堆積在側(cè)壁，容易造成一些細(xì)胞離心不充分，造成細(xì)胞的丟失，相反，自由轉(zhuǎn)角離心機(jī)能很好解決這個(gè)問(wèn)題所以，我們一般盡量使用自由轉(zhuǎn)角離心機(jī)。

1、細(xì)胞系（細(xì)胞株）

細(xì)胞系是來(lái)自多細(xì)胞生物體的細(xì)胞群體，其通常不會(huì)無(wú)限增殖，但是由于突變，逃避了正常細(xì)胞的衰老，從而可以持續(xù)分裂的一種細(xì)胞的集合。

因此，細(xì)胞可以在體外長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)。細(xì)胞系是研究多細(xì)胞生物體的生物化學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的非常重要的工具，例如信號(hào)通路、腫瘤殺傷、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、突變分析、基因表達(dá)、蛋白表達(dá)、細(xì)胞分化等等。此外，永生化的細(xì)胞系也已經(jīng)在生物技術(shù)中得到應(yīng)用，比如建立新來(lái)源、新突變的細(xì)胞系。

2、克隆細(xì)胞株

從一個(gè)經(jīng)過(guò)生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群，稱細(xì)胞株。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細(xì)胞群，亦可稱之為亞株。

3、二倍體細(xì)胞

細(xì)胞群染色體數(shù)目具有與原供體二倍細(xì)胞染色體數(shù)相同或基本相同（ 2n 細(xì)胞占 75%或 80%以上）的細(xì)胞群，稱二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。如僅數(shù)目相同，而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。二倍體細(xì)胞在正常情況下具有限生命期，故屬有限細(xì)胞系。

但隨供體年齡和組織細(xì)胞的不同，二倍體細(xì)胞的壽命長(zhǎng)短各異。人胚肺成纖維細(xì)胞可傳50代±10代，人胚腎只有8—10代，人胚神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞15—30 代；如從老齡個(gè)體取材培養(yǎng)，則細(xì)胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細(xì)胞系可供研究衰老之用。為保持二倍體細(xì)胞能長(zhǎng)期被利用，一般在初代或 2— 5 代即大量?jī)龃孀鳛樵N，用時(shí)再進(jìn)行增殖培養(yǎng)，用后再繼續(xù)凍存，可供長(zhǎng)期使用和延緩細(xì)胞的衰老。

4、初代培養(yǎng)（原代細(xì)胞培養(yǎng)）

原代培養(yǎng)是從供體獲取組織后的第一次培養(yǎng)，其優(yōu)點(diǎn)是：組織和細(xì)胞剛剛離體，生物性狀尚未發(fā)生很大的變化，具有二倍體遺傳性狀，在供體來(lái)源充分、生物條件穩(wěn)定的情況下（年齡、性別），在一定程度上能反映體內(nèi)狀態(tài)。原代培養(yǎng)所在機(jī)能上的改變，主要是表型上的改變，不一定為體細(xì)胞突變。從理論上講，人們有可能創(chuàng)造出一種條件，使原代培養(yǎng)細(xì)胞恢復(fù)體內(nèi)時(shí)的機(jī)能，因此原代培養(yǎng)細(xì)胞是研究基因表達(dá)的理想系統(tǒng)。采用原代培養(yǎng)細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)，如藥物測(cè)試等效果也很好；原代培養(yǎng)也是建立各種細(xì)胞系（株）必須經(jīng)過(guò)的階段。有一點(diǎn)也要注意到，原代培養(yǎng)的組織是由多種細(xì)胞成分組成的，比較復(fù)雜。

即使培養(yǎng)的是較純的單一類型的細(xì)胞，如上皮或成纖維細(xì)胞，也仍存在著異質(zhì)性，在分析細(xì)胞生物學(xué)特性時(shí)仍有一定困難。此外由于不同供體不同批次差異及其它一些原因，細(xì)胞生長(zhǎng)效果有時(shí)也會(huì)不一致。

WINSERA®特級(jí)胎牛血清適合培養(yǎng)哪些細(xì)胞？

1、特級(jí)胎牛血清具有非常好的促細(xì)胞生長(zhǎng)能力，適合培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞，原代細(xì)胞，部分干細(xì)胞和嬌貴細(xì)胞。

2、血清如何保存, 可以放多久？

3、貯藏溫度≤-15℃，可長(zhǎng)時(shí)間保存； 4℃存放時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。

4、血清溶解以后，出現(xiàn)沉淀怎么辦?

5、若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400-600g離心5min，上清液即可加入培養(yǎng)基內(nèi)一起培養(yǎng)。 我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物， 一方面它可能會(huì)阻塞您的過(guò)濾膜；另一方面，過(guò)濾血清這種行為可能會(huì)導(dǎo)致血清中部分營(yíng)養(yǎng)成分的流失。