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怎么做好微生物污染的預防？

微生物污染在細胞培養(yǎng)中是非常常見的，也是令人頭大的一件事情。所以我們一定要將問題扼殺于搖籃之中，規(guī)范實驗中的各個步驟，確保細胞“寶寶"在無污染的情況下健康成長。

1．實驗進行前，準備好所需的試劑和器材。玻璃吸管和玻璃培養(yǎng)瓶的消毒：1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上；2)干烤消毒140℃2小時以上。

2．培養(yǎng)基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗：將血清按10%加入培養(yǎng)基內(nèi)，用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培養(yǎng)基5-10ml置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天，肉眼見無渾濁或沉淀等異物。分裝后置4℃保存。

3．消化液(pH7.8)或其它加入液，應用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌，分裝成支置-20℃保存。

4．超凈臺用紫外燈照射30-60min，并開啟超凈臺風機運轉(zhuǎn)5-10min，然后用75%酒精擦拭超凈臺臺面，再開始實驗操作。

5．實驗進行時，佩戴好口罩及手套，穿上潔凈實驗服，有長發(fā)則將長發(fā)扎起或者佩戴帽子，避免灰塵或唾液進入培養(yǎng)物中。

6．進入超凈臺前應用75%酒精對雙手及手腕進行全面擦拭，確保除菌*。

7．實驗用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺內(nèi)。

8．操作時小心取用無菌物品，應避免污染。勿碰觸吸管尖頭，不小心碰觸后應立即更換；手及物品不要在暴露的瓶口上方來往，容器打開后，傾斜45度操作，操作完成后及時蓋上瓶蓋。

9．每次操作只處理一種細胞；即使不同細胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基，避免細胞間的交叉污染。

10．實驗用品用完應移出超凈臺，以利于空氣流通；實驗完成后用75%酒精擦拭超凈臺臺面。

11．定期清洗或更換超凈臺過濾膜、預濾網(wǎng)。

12．此外CO2培養(yǎng)箱的清潔是較易被忽視的地方，應1-2個月對培養(yǎng)箱定期進行清潔消毒。先用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)壁、隔板、水盤2-3次，用雙蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，最后紫外燈照射1h以上或進行高溫高壓滅菌處理。水盤內(nèi)加入無菌水（應每周更換），待培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度穩(wěn)定后再放入細胞。

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大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞低分化+GFP PC12低分化+GFP

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞 高分化 PC12高分化

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞 未分化 PC12未分化

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豬腎細胞系 PK-13

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小鼠腎小球系膜細胞永生化

雞腎小管上皮細胞永生化