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細(xì)胞名稱:人肺腺癌細(xì)胞(SPC-A1)
細(xì)胞介紹:該細(xì)胞源自一位男性肺腺癌患者。
細(xì)胞特性:
1)來源:肺癌
2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長
3)含量:>1x106
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
收到細(xì)胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
細(xì)胞用途:僅供科研使用。細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備1640 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;P/S雙抗,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例;
1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項(xiàng):
1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時(shí),液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。
人肺腺癌細(xì)胞(SPC-A1)
肺癌(carcinoma of the lung)是常見的惡性腫瘤之一。近年來肺癌的發(fā)病率及死亡率在世界范圍內(nèi)呈明顯上升的趨勢,我國城市人口與某些發(fā)達(dá)國家整體水平一樣,肺癌居常見腫瘤的。
根據(jù)WHO的新分類,組織學(xué)上將肺癌分為鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、大細(xì)胞癌、腺鱗癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、肉瘤癌、其他類型癌和唾液腺來源的癌等8個(gè)基本類型。肺鱗狀細(xì)胞癌是肺癌常見的類型。近年來肺腺癌發(fā)生率有不斷上升的趨勢,已接近或超過鱗狀細(xì)胞癌,是女性肺癌常見的類型,多為非吸煙者。
多數(shù)肺腺癌起源于較小的支氣管,為周圍型肺癌,癌腫多呈球塊狀并靠近胸膜。由于肺腺癌的解剖學(xué)和細(xì)胞行為特點(diǎn),易于發(fā)生血行轉(zhuǎn)移和胸腔浸潤,故在胸水中檢出肺癌細(xì)胞多為腺癌細(xì)胞。腺癌細(xì)胞在細(xì)胞形態(tài)上有其共同的特征,如細(xì)胞菊花狀、蜂窩狀或腺腔樣排列成團(tuán);細(xì)胞胞體大或巨大,不規(guī)則;核大,偏位,核仁明顯增大或多核仁;胞質(zhì)豐富,著色不均,有分泌顆?;蝠ひ号莸?,但不同的組織來源的腺癌、不同標(biāo)本類型浸潤的腺癌細(xì)胞也存在個(gè)體差異,現(xiàn)分析一例胸水中肺腺癌細(xì)胞的形態(tài)特征。
人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系 5-8F 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長
人鼻咽癌細(xì)胞 C666-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長
人鼻咽癌細(xì)胞 NPC/HK-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長
豬鼻甲黏膜成纖維細(xì)胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長
人卵巢癌細(xì)胞 A2780 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S
人卵巢癌細(xì)胞+GFP A2780+GFP 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S
人卵巢腺癌細(xì)胞 CAOV-3 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS+1%P/S
人卵巢癌細(xì)胞 CoC1 1640+10%FBS+1%P/S
人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞 ES-2 McCOY's 5A +10%FBS+1%P/S
人卵巢癌細(xì)胞 HEY DMEM+10%FBS+1%P/S
人卵巢癌細(xì)胞 HEY A8 DMEM+10%FBS+1%P/S
人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞 HO-8910PM 1640+10%FBS+1%P/S
人正常卵巢上皮細(xì)胞系 IOSE-80(IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN) 1640+10%FBS+1%P/S
人卵巢顆粒細(xì)胞瘤細(xì)胞 KGN D/F12+10%FBS+1%P/S
人卵巢腺癌細(xì)胞 OVCAR-3 1640(含NaHCO3 1.5g/L)+20%FBS+1%P/S + 0.01mg/ml牛胰島素
人卵巢癌細(xì)胞 SK-OV-3 Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S
人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-OV-3+LUC Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S
小鼠卵巢上皮癌細(xì)胞 ID8 DMEM+10%FBS+1%P/S
倉鼠卵巢細(xì)胞 CHO DMEM+10%FBS+1%P/S
倉鼠卵巢細(xì)胞,二氫葉酸還原酶缺陷 CHO/dhFr- IMDM+10%FBS+P/S1%+0.05mM次+0.016mM胸腺嘧啶+100nM氨甲喋呤。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1 F12K+10%FBS+1%P/S
中國倉鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1(懸浮) CHO GROW CD2培養(yǎng)基+1%L-谷氨酰胺+1%P/S
中國倉鼠卵巢細(xì)胞 CTLA4 IG-24 DMEM+10%FBS+0.2mM脯氨酸+0.001mM氨甲蝶呤+1%P/S
倉鼠卵巢細(xì)胞 LEC-1 MEMα+10%FBS+1%P/S
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞 95-D 1640+10%FBS+1%P/S
人肺癌細(xì)胞 A549 F12K+10%FBS+1%P/S
人肺癌細(xì)胞+RFP A549+RFP F12K+10%FBS+1%P/S
人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 A549+luc F12K+10%FBS+1%P/S
人肺癌細(xì)胞 Calu-1 MCCOY'S 5A+10%FBS+1%P/S
人肺癌細(xì)胞 DMS 53 Waymouth's MB 752/1 medium (Invitrogen, 11220-035)+10%FBS+1%P/S
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 HCC827 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCC827+LUC 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H1299 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%(10mM)HEPES +1%丙酮酸鈉+1%P/S
人肺癌細(xì)胞 NCI-H1437 1640+10%FBS+1%丙酮酸鈉+1%hepes+1%PS
人經(jīng)典小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-h1688 1640+20% FBS+1%P/S 細(xì)胞漲的慢2-3周發(fā)貨
人肺癌細(xì)胞 NCI-H1703 1640+10% FBS+1%P/S
人肺癌細(xì)胞 NCI-H1944 1640+10%FBS++1%PS
人肺癌細(xì)胞 NCI-H2126 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S
人肺癌細(xì)胞 NCI-H2228 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉
人肺癌細(xì)胞 NCI-H23 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉
人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) NCI-H292 1640+10%FBS+1%P/S
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H358 1640+10%FBS+1%P/S
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H446 1640+10%FBS+1%PS
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H460 [H460] 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H524 1640+10%FBS+1%P/S
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H661[h661] 1640+10%FBS+1%P/S
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H82 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S
人肺癌細(xì)胞 pc-9 1640+10%FBS+1%P/S
人小細(xì)胞肺癌 SBC-2 1640+10%FBS+1%P/S
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 SHP-77 1640+10FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1% PS
小鼠肺癌細(xì)胞 LLC DMEM+10%FBS+1%P/S
小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LLC+LUC DMEM+10%FBS+1%P/S