您好，歡迎來到蘇州千舍生物科技有限公司！
15371470969
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產(chǎn)品名稱：人乳腺癌阿霉素耐藥細胞(MCF-7/Adr)
細胞特性
1） 來源：乳腺癌
2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x106 細胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途：僅供科研使用。
運輸和保存：干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
注意：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的，待細胞長到70-80%匯合度時，去掉培養(yǎng)液，加含400ng/ml阿霉素藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時間會有少部分細胞懸浮起來，屬于正常情況，通過換液可以去掉，等細胞長滿就可以消化傳代了，這時可以一直用含藥物培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞，兩代之后就可以將藥物濃度提高到500ng/ml，細胞凍存時不要在培養(yǎng)基中加藥物。
1）準備1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 ，優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10%，P/S青霉素-鏈霉素 1%，500ng/mL ADR。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1） 凍存細胞的復(fù)蘇：：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例；
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
人乳腺癌阿霉素耐藥細胞(MCF-7/Adr)注意事項：
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。
| 人肺癌細胞熒光素酶標記 | A549+luc | F12K+10%FBS+1%P/S |
| 人膽囊癌細胞熒光素酶標記 | GBC-SD+LUC | 1640+10%FBS+1%P/S |
| 人永生化表皮細胞熒光素酶標記 | HACAT+LUC | DMEM+10%FBS+1%PS |
| 人非小細胞肺癌細胞熒光素酶標記 | HCC827+LUC | 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S |
| 人結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記 | HCT116+LUC | McCOY's 5A +10%FBS+1%P/S |
| 人宮頸癌細胞熒光素酶標記 | HELA+LUC | MEM+10%FBS+1%P/S |
| 人胃癌細胞黃色熒光標記 | HGC-27+YFP | DMEM+10%FBS+1%P/S |
| 人結(jié)直腸癌細胞熒光素酶標記 | LOVO+LUC | F12K+10%FBS+1%P/S |
| 人乳腺癌細胞熒光素酶標記 | MCF-7+luc | MEM+10%FBS+0.01mg/mL胰島素+1%P/S |
| 人乳腺癌細胞熒光素酶標記 | MDA-MB-231+LUC | L15+10%FBS+1%P/S |
| 人高轉(zhuǎn)移性肝癌細胞熒光素酶標記 | MHCC-97H+luc | DMEM+10%FBS+1%P/S |
| 人胃癌細胞熒光素酶標記 | NCI-N87+LUC | 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S |
| 人皮膚黑色素瘤細胞熒光素酶標記 | SK-MEL-2+LUC | MEM+10%FBS+1%P/S |
| 人卵巢癌細胞熒光素酶標記 | SK-OV-3+LUC | Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S |
| 人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細胞熒光素酶標記 | U251 MG/TMZ+LUC(3000) | DMEM+10%FBS +1%P/S +TMZ |
| 人乳腺癌細胞熒光素酶標記 | ZR-75-1+luc | 1640含 NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS+1%P/S |
| 小鼠乳腺癌細胞熒光素酶標記 | 4T1+luc | 1640+10%FBS+1%P/S |
| 小鼠黑色素瘤細胞熒光素酶標記 | B16-F10+LUC | DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S |
| 小鼠結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記 | CT26+LUC | 1640+10%FBS+1%P/S |
| 小鼠膠質(zhì)細胞瘤熒光素酶標記 | GL-261+luc | DMEM+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1% HEPES+1%P/S |
| 小鼠肝癌細胞熒光素酶標記 | HEPA1-6+LUC | DMEM（含NaHCO3 1.5g/L+10%FBS+1%丙酮酸納+1%P/S |
| 小鼠卵巢上皮癌細胞熒光素酶標記 | ID8+LUC | DMEM+10%FBS+1%P/S |
| 小鼠骨肉瘤成骨細胞熒光素酶標記 | K7M2WT(K7M2-WT)-LUC | DMEM+10%FBS+1%P/S |
| 小鼠肺癌細胞熒光素酶標記 | LLC+LUC | DMEM+10%FBS+1%P/S |
| 小鼠結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記 | MC38+LUC | DMEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1% HEPES+1%P/S |
| 小鼠腦神經(jīng)瘤細胞熒光素酶標記 | neuro-2a+luc | MEM+10%FBS+1%P/S |
| 小鼠胰腺癌細胞熒光素酶標記 | panc02+LUC | DMEM+5%FBS+1%P/S |
| 小鼠前列腺癌細胞熒光素酶標記 | RM-1+LUC | DMEM+10%FBS+1%P/S |
| 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞綠色熒光標記 | C6+LUC | F12K +2.5%FBS+15%HS（馬血清）+1%P/S |
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