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細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染以及解決方案
更新時(shí)間：2020-04-23　點(diǎn)擊量：2727

細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況總結(jié)如下

常見的污染如下：

1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理

2、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細(xì)胞仍可生長，但時(shí)間長之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差，

用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時(shí)轉(zhuǎn)移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。

其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預(yù)防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗；但細(xì)胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線菌素D或雙抗都于事無補(bǔ)，建議舍棄該污染細(xì)胞。，將環(huán)境*消毒，如果所有細(xì)胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問題，就要注意操作

3、支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測(cè)，而支原體是牛血清中的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細(xì)胞培養(yǎng)，無任何不良反應(yīng)。Sigma公司的使用時(shí)用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。

4、黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會(huì)太影響，細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長狀態(tài)良好，且觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號(hào)的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對(duì)細(xì)胞生長狀態(tài)不會(huì)有明顯影響，在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話，可以增加細(xì)胞的種板密度，以提高細(xì)胞的生存率。

5、真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清，慢慢的會(huì)長出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。

6、原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多，輕微活動(dòng)，細(xì)胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細(xì)胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長，只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長，終形成惡性循環(huán)。

污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等

關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細(xì)胞），37度試培養(yǎng)一段時(shí)間后觀察。如果沒有細(xì)菌生長 就是操作的問題。也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）。但雙抗有時(shí)會(huì)影響細(xì)胞的狀態(tài)，所以在做轉(zhuǎn)染、檢測(cè)細(xì)胞某項(xiàng)指標(biāo)前一定要撤去雙抗，以避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1、孵箱應(yīng)定期用三氧機(jī)消毒 或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時(shí)孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水

2、超凈臺(tái)\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素

3、超凈臺(tái)的風(fēng)機(jī)不能過大，風(fēng)機(jī)到6-8格。否則也可能能致霉菌污染

4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時(shí)即可進(jìn)入操作

細(xì)胞庫細(xì)胞

SHG-44 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞
SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
SHZ-88大鼠乳腺癌細(xì)胞
SiHa人子宮頸鱗癌細(xì)胞
SK-BR-3人乳腺癌細(xì)胞
SK-Hep-1人肝癌細(xì)胞
SK-MES-1人肺鱗癌細(xì)胞
SK-N-SH人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
SK-OV-3人卵巢癌細(xì)胞
SMMC-7721人肝癌細(xì)胞
SP2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞
SPC-A-1人肺癌細(xì)胞
ST豬睪丸細(xì)胞
STO小鼠胚成纖維細(xì)胞
SVEC4-10小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞
SV-HUC-1人膀胱上皮永生化細(xì)胞
SW480人結(jié)腸癌細(xì)胞
SW579人甲狀腺鱗癌細(xì)胞  
SW620人結(jié)腸癌細(xì)胞
SW626人卵巢癌細(xì)胞
T24人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞
T-47D人乳腺管癌細(xì)胞
T84人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞
Tca-8113人舌鱗癌細(xì)胞
TE-1人食管癌細(xì)胞
TF-1人血液白血病細(xì)胞
THP-1人髓系白血病單核細(xì)胞
TM3小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞
TSCCa人舌鱗癌細(xì)胞
U-2 OS人骨肉瘤細(xì)胞
U251人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞
U-87 MG人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
U-937人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
V79倉鼠肺細(xì)胞
VCaP人前列腺癌細(xì)胞
Vero非洲綠猴腎細(xì)胞
WI-38人胚肺細(xì)胞
WISH人羊膜細(xì)胞
Y1(Y-1)小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞
YAC-1小鼠淋巴瘤細(xì)胞
ZR-75-1人乳腺癌細(xì)胞
ZR-75-30人乳腺癌細(xì)胞
16HBE人支氣管上皮樣細(xì)胞
801-D 人巨細(xì)胞性肺癌細(xì)胞
MC3T3-E1 Subclone 24小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞
A2 人腺樣囊性癌細(xì)胞
A-427人肺癌細(xì)胞
A-498人腎癌細(xì)胞
A875人黑色素瘤細(xì)胞
AM 人腺樣囊性癌細(xì)胞（高轉(zhuǎn)移）
BC-009人乳腺癌細(xì)胞
BC-019人乳腺癌細(xì)胞
BC-020人乳腺癌細(xì)胞
BC-021人乳腺癌細(xì)胞
BC-022人乳腺癌細(xì)胞
BE(2)-M17人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
L6565小鼠白血病克隆細(xì)胞系
C918人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞
CAL 27人舌鱗癌細(xì)胞
LS 180人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
CNE-2Z 人鼻咽癌細(xì)胞
COLO 201人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
CW-2人結(jié)腸癌細(xì)胞
CRT 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞
D283 Med人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞
EA.hy926人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞
ECV-304人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
EJ 人膀胱癌細(xì)胞
NCI-H1395人肺腺癌細(xì)胞
H-97 人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞
HCC 94(HCC941122)人子宮鱗癌細(xì)胞（高分化）
HCCLM3人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞
UMNSAH/DF-1雞胚成纖維細(xì)胞
HEL 人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞
HELF 人胚肺成纖維細(xì)胞
HO-8910PM 人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞
Ishikawa 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞
CTLA4 Ig-24中國倉鼠卵巢細(xì)胞
3T6-Swiss albino小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
M1小鼠白血病細(xì)胞
M14 人黑色素瘤細(xì)胞
MA-891 小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞
MDA-MB-435 人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞
MDA-MB-468 人乳腺癌細(xì)胞
MKN-28人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞
MKN-45人胃癌細(xì)胞
MuM-2B 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞
MuM-2C 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞
MV3 人黑色素瘤細(xì)胞
MX-1 人乳腺癌細(xì)胞
Y3-Ag 1.2.3大鼠骨髓瘤細(xì)胞
NCI-H1975人肺腺癌細(xì)胞
NCI-H460 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H661人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞
M-NFS-60 小鼠髓性白血病淋巴細(xì)胞/小鼠白血病G-CSF依賴性細(xì)胞
PA319 人大腸癌細(xì)胞
PATU8988 人胰腺癌細(xì)胞
PC-3M 人前列腺癌細(xì)胞
SF-295 人XG惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞
SMC-1人胸膜瘤細(xì)胞
SW1116人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
TE-13 人食管癌細(xì)胞
TG-905 人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
VE 人血管內(nèi)皮細(xì)胞
293E人胚腎細(xì)胞（EBNA1基因修飾）
293ET人胚腎細(xì)胞（SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞）
293FT人胚腎細(xì)胞
2V6.11人胚腎細(xì)胞
A3人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
A7r5大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
AML-193人急性單核細(xì)胞白血病單核細(xì)胞
B16-F1小鼠黑色素瘤細(xì)胞
B16-F10小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞
BC3H1小鼠腦瘤細(xì)胞
BEL-7405人肝癌細(xì)胞
Beta-TC-6小鼠胰島素瘤胰島β細(xì)胞
BNL 1ME A.7R.1小鼠肝上皮細(xì)胞
BT-20人乳腺癌細(xì)胞
C3H/10T1/2, Clone 8小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
Caki-2人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞
Calu-6人肺退行性癌細(xì)胞
CEM/C1人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
Chang liver人張氏肝細(xì)胞
Detroit 562人咽頭癌胸水轉(zhuǎn)移細(xì)胞
CTLL-2小鼠T細(xì)胞
Dami人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞
E.G7-OVA小鼠T淋巴瘤細(xì)胞
EB-3人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞
EBTr (NBL-4)牛胚氣管細(xì)胞
FC33人胚胎腎細(xì)胞（Asp-2基因修飾）
FO小鼠骨髓瘤細(xì)胞
G1發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞
G-401人腎癌Wilms細(xì)胞
GH3大鼠垂體瘤細(xì)胞
H22小鼠肝癌細(xì)胞
H4-II-E-C3大鼠肝癌細(xì)胞 
HA人羊膜細(xì)胞
OKT 11小鼠雜交瘤細(xì)胞(抗CD2)
HB611人肝癌細(xì)胞
HBE人支氣管上皮樣細(xì)胞
HCC38人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
Hce-8693人盲腸腺癌細(xì)胞（未分化）
HeLa 299人宮頸癌細(xì)胞
HeLa S3人宮頸癌細(xì)胞
Hep B1.2人肝癌細(xì)胞
HFF-1人包皮成纖維細(xì)胞
hFOB 1.19SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞
HFSF人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞
HFT-8810人胎兒胸腺細(xì)胞株
HGF-1人牙齦成纖維細(xì)胞
HHCC人肝癌細(xì)胞
HKC人肝癌細(xì)胞
HLF-a人肺細(xì)胞
HOS人骨肉瘤細(xì)胞
HPAC人胰腺腺泡上皮癌
HS 683人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞
Hs68人男性正常頭細(xì)胞
HuT 78人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
HuTu-80人十二脂腸腺癌
IAR20大鼠肝細(xì)胞
IM-9人外周血B淋巴細(xì)胞
INS-1大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞
IR983F大鼠骨髓瘤細(xì)胞
J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞
K7M2 wt小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞
KATO III人胃癌細(xì)胞
KiMA人胚腎上皮細(xì)胞
KP-N-NS人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(腦轉(zhuǎn)移)
L Wnt-3A小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞
LA795小鼠肺腺癌細(xì)胞
LLC-WRC 256大鼠腹水癌細(xì)胞
MC3T3-E1  Subclone 14小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14
MCF 7B人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-157人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-175VII人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
MDA-MB-415人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-436人乳腺癌細(xì)胞
MDA-MB-468-06人乳腺癌細(xì)胞
MFC-GFP小鼠前胃癌細(xì)胞（綠色熒光蛋白標(biāo)記）
MPC-11小鼠漿細(xì)胞瘤
MS751人子宮頸表皮癌細(xì)胞
NCI-H157人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞
NCI-H1688人典型小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H1703人肺鱗癌細(xì)胞
NCI-H205人腎上腺腺瘤細(xì)胞
NCI-H2087人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞
NCI-H209人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H2170人肺鱗癌細(xì)胞
NCI-H2227人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H226人肺鱗癌細(xì)胞
NCI-H23人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H2452人間皮瘤細(xì)胞
NCI-H295R人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞
NCI-H358人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H446人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H520人肺鱗癌細(xì)胞
NCI-H524人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCI-H596人肺腺鱗癌細(xì)胞
NCI-H716人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
NCI-H838人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
NCTC 1469小鼠正常肝細(xì)胞
NEC人食管癌細(xì)胞
P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]小鼠骨髓瘤細(xì)胞
P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤細(xì)胞
PA-1人卵巢畸胎瘤細(xì)胞
PC-12(未分化)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化)
PC-3M-2B4人前列腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株
PC-3M IE8人前列腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株
PLC/PRF/5人肝癌亞力山大細(xì)胞
Psi2 DAP小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
QG-56人肺扁平上皮癌細(xì)胞
QGY-7703人肝癌細(xì)胞
QSG-7701人肝細(xì)胞
R 1610倉鼠肺細(xì)胞
RAG小鼠腎腺癌細(xì)胞
RBL-1大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞
RIN-m5f大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞
RK1大鼠腎細(xì)胞
RKO-AS45-1人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞
RKO-E6人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞
RL1大鼠肺成纖維樣細(xì)胞
RM1大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞
Romas人淋巴瘤細(xì)胞
RS1大鼠皮膚成纖維樣細(xì)胞
RT4人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤細(xì)胞
RTE大鼠氣管上皮細(xì)胞
RWPE-2人前列腺正常細(xì)胞
SC-1小鼠胚胎細(xì)胞
SF126人腦瘤細(xì)胞
SF17人腦瘤細(xì)胞
SF763人腦瘤細(xì)胞
SF767人腦瘤細(xì)胞
SK-CO-1人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
SK-MEL-1人皮膚黑色素瘤細(xì)胞
SK-N-BE(2)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
SK-NEP-1人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞
SK-N-MC人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞
SNU-5人胃癌細(xì)胞
Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細(xì)胞
SUP-B15人Ph+急淋白血病細(xì)胞系
SW 1353人軟骨肉瘤細(xì)胞
SW 1990人胰腺癌細(xì)胞
SW 780人膀胱移行細(xì)胞癌
SW 982人滑膜肉瘤細(xì)胞
SW-13人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞
T/G HA－VSMC人血管平滑肌細(xì)胞
TE-10人食管癌細(xì)胞
TE-11人食管癌細(xì)胞
L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)小鼠淋巴瘤細(xì)胞
TM4正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞
TT人甲狀腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
U-118 MG人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤
U14小鼠子宮頸癌細(xì)胞
U14-GFPGFP標(biāo)記的小鼠子宮頸癌細(xì)胞
UACC-812人乳腺導(dǎo)管瘤細(xì)胞
UMR-106大鼠骨肉瘤細(xì)胞
UM-UC-3人膀胱移行細(xì)胞癌
USMC大鼠血管平滑肌細(xì)胞
WERI-Rb-1人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞
WI38/VA13SV-40Z轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞
WPMY-1人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞
Pt K1 (NBL-3)袋鼠腎細(xì)胞
293T/17人胚腎細(xì)胞
SV40 MES 13小鼠腎小球系膜細(xì)胞
AE-1小鼠雜交瘤細(xì)胞(抗AChE)
AE-2小鼠雜交瘤細(xì)胞(抗AChE)
Super Tube狗腎細(xì)胞
SNU-1人胃癌細(xì)胞
A-204 [A204]人橫紋肌肉瘤細(xì)胞
B95-8EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細(xì)胞
BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
CCC-SMC-1兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
MA-104羅猴胎腎細(xì)胞
PC-12(低分化)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化)
PC-12(高分化)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化)
PED豬內(nèi)皮細(xì)胞
RAMOS人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞
Reh人急性淋巴細(xì)胞白血?。ǚ荁非T）
SW837人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞
TE671 subline No.2人橫紋肌肉瘤細(xì)胞
P69人前列腺上皮細(xì)胞