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酶聯(lián)免疫吸附實驗 ELISA
更新時間:2020-03-15 點擊量:1362

酶聯(lián)免疫吸附實驗 ELISA

一.實驗目的
     酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay 簡稱ELISA)是在免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic techniques)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù),ELISA過程包括抗原(抗體)吸附在固相載體上稱為包被,加待測抗體(抗原), 再加相應酶標記抗體(抗原),生成抗原(抗體)--待測抗體(抗原)--酶標記抗體的復合物,再與該酶的底物反應生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計的光吸收計算抗體(抗原)的量。待測抗體(抗原)的定量與有色產(chǎn)生成正比。
二.ELISA常用的四種方法

    1.直接法測定抗原 
      將抗原吸附在載體表面;
      加酶標抗體,形成抗原抗體復合物;
      加底物。底物的降解量=抗原量。 

     2.間接法測定抗體
     將抗原吸附于固相載體表面;
      加抗體, 形成抗原-抗體復合物;
      加酶標抗體;
      加底物。 測定底物的降解量=抗體量。

    3.雙抗體夾心法測定抗原
     將抗原免疫一種動物獲得的抗體吸附于固相表面;
     加抗原,形成抗原-抗體復合物
     加抗原免疫第二種動物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復合物;
     加酶標抗抗體(第二種動物抗體的抗體)
     加底物。底物的降解量=抗原量。

    4. 競爭法測定抗原
    將抗體吸附在固相載體表面;
     1 加入酶標抗原;
     2,3)加入酶標抗原和待測抗原;
     加底物。對照孔與樣品孔底物降解量的差=未知抗原量。 
三.ELISA試劑盒目錄

 

 

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