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蘇州千舍生物教你如何更好的培養(yǎng)細(xì)胞

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題從細(xì)胞生長角度來說，針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。

一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁

可能原因：

●胰蛋白酶消化過度 ；

●支原體污染 ；

●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；               

●細(xì)胞老化 ；

●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 。

解決方法：

●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；

●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2 ；

●啟用新的保種細(xì)胞 ；

●調(diào)節(jié)zui佳接種細(xì)胞濃度。

二、懸浮細(xì)胞成簇

可能原因：

●培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 ；

●支原體污染；

●蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解；

●DNA污染 。

解決方法：

●用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液；

●分離培養(yǎng)物，檢測支原體；

●用DNaseI處理細(xì)胞。

三、培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢

可能原因：

●由于更換不同培養(yǎng)液或血清；

●培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞；

●培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；

●試劑保存不當(dāng)；

●接種細(xì)胞起始濃度太低；

●細(xì)胞已老化；

●支原體污染 。

解決方法：

●比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實驗，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；

●換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補加谷氨酰胺及生長因子；

●用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；

●血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；

●增加接種細(xì)胞起始濃度；

●換用新的保種細(xì)胞；

●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

四、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好

可能原因：

●細(xì)胞本身的狀態(tài)

細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化；

細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢；

細(xì)胞傳代時間過晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長；

胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細(xì)胞死亡；時間過短，細(xì)胞未*分離而成團，細(xì)胞死亡；

細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。

●污染

支原體污染；

霉菌污染。

●培養(yǎng)基或血清

更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗證；

選擇的培養(yǎng)基是否合適；

培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤。

●培養(yǎng)環(huán)境

CO2供應(yīng)是否正常；

培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。

解決方法：

根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案

●注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；

●避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；

●要用合適的血清或培養(yǎng)基，zui好經(jīng)過驗證；

●注意實驗室的環(huán)境。

五、培養(yǎng)細(xì)胞死亡

可能原因：

●培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2；

●培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大；

●細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷；

●培養(yǎng)液滲透壓不正確；

●培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。

解決方法：

●檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；

●檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；

●取新的保存細(xì)胞種；

●檢測培養(yǎng)液滲透壓；

●換入新鮮培養(yǎng)液。

Hyclone胎牛血清SH30084.03

Hyclone胎牛血清SH30406.02

Hyclone胎牛血清SH30406.05

Hyclone胎牛血清SH30396.03

Hyclone胎牛血清SH30070.03

特級胎牛血清 SH30070.03E

Hyclone胎牛血清 SH30370.03

活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03

活性炭/葡聚糖處理胎牛血清，熱滅活 SH30068.03HI

馬血清SH30074.03

烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03

Hyclone胎牛血清SH30071.03

Hyclone胎牛血清SV30160.03

BOVOGEN胎牛血清 SFBS

BOVOGEN新生牛血清 SNCS

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101

PAA 優(yōu)等胎牛血清FBS A15-151

BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS

BI ES級別胎牛血清 04-002-1A

BI 間充質(zhì)胎牛血清 04-400-1A

Corning胎牛血清 35-076-CV

PAN胎牛血清FBS P30-3302

PAN胎牛血清FBS ST30-3302

PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602

PAN胎牛血清Plus ST30-3302P

NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE

Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108

Gemini特級胎牛血清 100-500

Gemini科研用人AB血清100-512

TCB胎牛血清 101ZC

Sigma 特級胎牛血清F2442

Sigma正常人AB血清 H4522

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1

胎牛血清盒裝A31608-02、馬血清16050-122

雙抗15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

LOVO/5-FU 人結(jié)腸癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

HCT116/L人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細(xì)胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病細(xì)胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌細(xì)胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人結(jié)腸癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

HNE1/DDP人鼻咽癌細(xì)胞順鉑耐藥株

SGC7901/5-fu人胃癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

A549/DDP人肺癌細(xì)胞順鉑耐藥株

MCF-7/DDP人乳腺癌細(xì)胞順鉑耐藥株

A549/ADR人肺癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

SGC7901/DDP人胃癌細(xì)胞順鉑耐藥株

SKOV3/DDP人卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥株

HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細(xì)胞株

NCI-H1650 人肺支氣管癌細(xì)胞

RT4 人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤

SK-N-MC 人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞

SK-N-SH 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

SW982 人滑膜肉瘤細(xì)胞

T98G 人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤

U251MG(KO) 人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞

U266 人骨髓瘤細(xì)胞

VCAP 人前列腺癌細(xì)胞

hTERT-HPNE 人胰腺導(dǎo)管細(xì)胞

ES-2 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞

NCI-H1650人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

H460 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞

HACAT 人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞

HCT116 人結(jié)腸癌細(xì)胞

HEK293 人胚腎細(xì)胞

HEPG2 人肝癌細(xì)胞

HGC27 人胃癌細(xì)胞(未分化)

HT-29 人結(jié)腸癌細(xì)胞

HUVEC 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

KYSE150人食道癌細(xì)胞

L02(HL7702)人正常肝細(xì)胞  

LOVO 人結(jié)腸癌細(xì)胞

MCF-10A人正常乳腺上皮細(xì)胞

MCF7人乳腺癌細(xì)胞

LX-2 人肝星狀細(xì)胞

MDA-MB-468人乳腺癌細(xì)胞